DNaza I
DNaza I (deoksyrybonukleaza I) to endodeoksyrybonukleaza, która może trawić jedno- lub dwuniciowy DNA.Rozpoznaje i rozszczepia wiązania fosfodiestrowe, tworząc monodeoksynukleotydy lub jedno- lub dwuniciowe oligodeoksynukleotydy z grupami fosforanowymi na 5′-końcu i hydroksylowymi na 3′-końcu.Aktywność DNazy I zależy od Ca2+ i może być aktywowana przez jony metali dwuwartościowych, takich jak Mn2+ i Zn2+.5mM Ca2+ chroni enzym przed hydrolizą.W obecności Mg2+ enzym może losowo rozpoznać i przeciąć dowolne miejsce na dowolnej nici DNA.W obecności Mn2+ podwójne nici DNA można jednocześnie rozpoznać i rozciąć w niemal tym samym miejscu, tworząc fragmenty DNA o płaskich końcach lub fragmenty DNA o lepkich końcach z wystającymi 1-2 nukleotydami.
Właściwość produktu
DNazę I trzustki bydlęcej wyrażano w drożdżowym układzie ekspresyjnym i oczyszczano.
Ckomponenty
| Część | Tom | |||
| 0,1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNaza I, wolna od RNazy | 20µL | 200µL | 1ml | 10ml |
| 10 x bufor DNazy I | 1ml | 1ml | 5×1 ml | 5×10ml |
Przewożenie i przechowywanie
1. Stabilność przechowywania: – 15 ℃ ~ -25 ℃ podczas przechowywania;
2.Stabilność transportu: Transport pod okładami z lodu;
3. Dostarczane w: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% gliceryny, pH 7,6 w temperaturze 25℃.
Definicja jednostki
Jedną jednostkę definiuje się jako ilość enzymu, która całkowicie rozkłada 1 µg DNA pBR322 w ciągu 10 minut w temperaturze 37°C.
Kontrola jakości
RNaza:5 U DNazy I z 1,6 µg RNA MS2 przez 4 godziny w temperaturze 37°C nie powoduje degradacji, jak określono metodą elektroforezy w żelu agarozowym.
Bakteryjny Endotoksyna:Test LAL, zgodnie z Farmakopeą Chińską, wydanie IV 2020, metoda testu żelowego, zasada ogólna (1143).Zawartość endotoksyn bakteryjnych powinna wynosić ≤10 EU/mg.
Instrukcja użycia
1.Przygotować roztwór reakcyjny w probówce wolnej od RNazy w podanych poniżej proporcjach:
| Część | Tom |
| RNA | X µg |
| 10 x bufor DNazy I | 1 µl |
| DNaza I, wolna od RNazy (5U/μL) | 1 U na µg RNA |
| ddH2O | Do 10 µl |
2,37 ℃ przez 15 minut;
3.Dodaj bufor terminujący, aby zatrzymać reakcję i ogrzewaj w temperaturze 65°C przez 10 minut w celu inaktywacji DNazy I. Próbkę można bezpośrednio wykorzystać w następnym eksperymencie z transkrypcją.
Notatki
1.Użyj 1U DNazy I na μg RNA lub 1U DNazy I na mniej niż 1μg RNA.
2.EDTA należy dodać do końcowego stężenia 5 mM, aby zabezpieczyć RNA przed degradacją podczas inaktywacji enzymu.
