Jednostopniowa szybka mieszanka sondy RT-qPCR Premix-UNG
Nr kat.: HCR5143A
Zestaw sondy One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) to oparty na sondzie zestaw do szybkiego wykrywania RT-qPCR, odpowiedni do ilościowej reakcji PCR typu single-plex lub multiplex, z wykorzystaniem RNA jako matrycy (takiego jak wirus RNA).W tym produkcie zastosowano nową generację modyfikowanej przeciwciałami polimerazy DNA Taq i jednoetapowej dedykowanej odwrotnej transkryptazy, ze zoptymalizowanym buforem do szybkiej amplifikacji, który charakteryzuje się większą szybkością amplifikacji, wyższą wydajnością i specyficznością amplifikacji.Obsługuje zrównoważone wzmocnienie zarówno w trybie single-plex, jak i multipleksowym próbek o niskim i wysokim stężeniu w krótkim czasie.
składniki
1. 5×bufor RT-qPCR (U+)
2. Mieszanka enzymów (U+)
Uwagi:
A.Bufor 5×RT-qPCR (U+) zawiera dNTP i Mg2+;
B.Mieszanka enzymów (U+) obejmuje odwrotną transkryptazę, polimerazę DNA Hot Start Taq, inhibitor RNazy i UDG;
C.Używaj końcówek wolnych od RNaz, probówek EP itp.
Przed użyciem dokładnie wymieszać bufor 5×RT-qPCR (U+).Jeśli po rozmrożeniu wytrąci się osad, należy poczekać, aż bufor powróci do temperatury pokojowej, wymieszać i rozpuścić, a następnie użyć go normalnie.
Warunki przechowywania
Produkt jest dostarczany z suchym lodem i można go przechowywać w temperaturze -25 ~ -15 ℃ przez 1 rok.
Instrukcje
1. Reakcja System
| składniki | Objętość (20 µl reakcja) |
| 2 ×bufor RT-qPCR | 4µl |
| Mieszanka enzymów (U+) | 0,8µl |
| Podkład do przodu | 0,1 ~ 1,0 μM |
| Odwrócenie podkładu | 0,1 ~ 1,0 μM |
| Sonda TaqMan | 0,05 ~ 0,25 μM |
| Szablon | X µl |
| Woda wolna od RNaz | do 25µL |
Uwagi: Objętość reakcji wynosi 10–50 µl.
2. Protokół rowerowy (Sstandardowy)
| Cykl krok | Temp. | Czas | Cykle |
| Transkrypcja odwrotna | 55 ℃ | 10 minut | 1 |
| Początkowa denaturacja | 95 ℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturacja | 95 ℃ | 10 sek | 45 |
| Wyżarzanie/Wydłużanie | 60 ℃ | 30 sek |
| Protokół rowerowy (Szybko) Cykl krok |
Temp. |
Czas |
Cykle |
| Transkrypcja odwrotna | 55 ℃ | 5 minut | 1 |
| Początkowa denaturacja | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Denaturacja | 95 ℃ | 3 s | 43 |
| Wyżarzanie/Wydłużanie | 60 ℃ | 10 s |
Uwagi:
A.Temperatura odwrotnej transkrypcji wynosi od 50 ℃ do 60 ℃, zwiększenie temperatury pomaga amplifikować złożone struktury i szablony o wysokiej zawartości CG;
B.Należy dostosować optymalną temperaturę hybrydyzacji w oparciu o wartość Tm startera i wybrać najkrótszy czas zbierania sygnału fluorescencji w oparciu o instrument Real Time PCR.
Notatki
Aby zapewnić sobie zdrowie i bezpieczeństwo, należy nosić niezbędne środki ochrony indywidualnej, takie jak fartuch laboratoryjny i rękawiczki!
