Polimeraza DNA Robustart Taq

Robustart Taq DNA Polymerase to polimeraza DNA typu „gorący start”.Produkt ten może nie tylko lepiej hamować niespecyficzną reakcję spowodowaną niespecyficzną hybrydyzacją starterów lub agregacją starterów w procesie przygotowania i amplifikacji układu PCR.Dlatego ma doskonałą specyficzność i jest bardziej skuteczny w amplifikacji matryc o niskim stężeniu i nadaje się do reakcji amplifikacji multipleksowej PCR.Ponadto produkt ten charakteryzuje się bardzo dobrą stosowalnością, a stabilne wyniki amplifikacji można uzyskać w różnych typach reakcji PCR.

składniki

1.5 U/µL polimerazy DNA Robustart Taq

2.10 × Bufor PCR II (bez Mg²+) (opcjonalnie)

3.25 mM MgCl₂(opcjonalny)

* 10 × Bufor PCR II (wolny od Mg²+) nie zawiera dNTP i Mg²+, należy dodać dNTP i MgCl₂podczas przygotowywania układu reakcyjnego.

Polecane aplikacje

1.Szybkie wzmocnienie.

2.Wielokrotne wzmocnienie.

3.Bezpośrednia amplifikacja krwi, wymazów i innych próbek.

4.Wykrywanie chorób układu oddechowego.

Stan przechowywania

-20°C w przypadku długotrwałego przechowywania, należy dobrze wymieszać przed użyciem, unikać częstego zamrażania i rozmrażania.

*Jeśli po schłodzeniu wystąpią opady, jest to normalne;zaleca się osiągnięcie temperatury pokojowej przed zmieszaniem i użyciem.

Definicja jednostki

Jedną jednostkę aktywną (U) definiuje się jako ilość enzymu, która włącza 10 nmol dezoksyrybonukleotydu do materiału nierozpuszczalnego w kwasie w temperaturze 74°C przez 30 minut, stosując DNA aktywowanej spermy łososia jako matrycę/starter.

Kontrola jakości

1.Czystość elektroforetyczna SDS-PAGE większa niż 98%.

2.Czułość amplifikacji, kontrola między partiami, stabilność.

3.Brak aktywności egzogennej nukleazy, brak zanieczyszczenia egzogenną endonukleazą lub egzonukleazą

Instrukcje

Konfiguracja reakcji

Uwagi:

1)Bufor nie zawiera dNTP i Mg²+, należy dodać dNTP i MgCl₂podczas przygotowywania układu reakcyjnego.

2) b.W przypadku stosowania do qPCR/qRT-PCR do układu reakcyjnego należy dodać sondy fluorescencyjne.Zwykle końcowe stężenie startera wynoszące 0,2 µM daje dobre wyniki;jeśli przebieg reakcji jest słaby, stężenie startera można regulować w zakresie 0,2-1 µM.Stężenie sondy jest zwykle optymalizowane w zakresie 0,1-0,3 µM.Aby znaleźć najlepszą kombinację startera i sondy, można przeprowadzić eksperymenty z gradientem stężeń.

Protokół cyklu termicznego

Notatki

1.Szybkość amplifikacji szybkiej polimerazy DNA nie powinna być mniejsza niż 1 kb/10 s.Szybkość wzrostu i spadku temperatury, tryb kontroli temperatury i wydajność przewodzenia ciepła w różnych aparatach do PCR znacznie się różnią, dlatego zaleca się optymalizację optymalnych warunków reakcji dla konkretnego aparatu do szybkiego PCR.

2.System charakteryzuje się dużą elastycznością i większą swoistością i czułością.

3.Nadaje się do stosowania jako odczynniki do wykrywania PCR o wysokiej czułości i może być stosowany w reakcjach amplifikacji multipleksowej PCR.

4.Aktywność polimerazy 5′ → 3′, aktywność egzonukleazy 5′ → 3′;brak aktywności egzonukleazy 3′ → 5′;brak funkcji korekty.

5.Nadaje się do jakościowych i ilościowych testów PCR i RT-PCR.

6.Koniec 3' produktu PCR to A, który można bezpośrednio wklonować do wektora T.

7.Metoda trzyetapowa jest zalecana w przypadku starterów o niskich temperaturach przyłączania lub do amplifikacji fragmentów dłuższych niż 200 bp.