Polimeraza DNA Bst 2.0 (bez glicerolu, o dużej gęstości)
Bst polimeraza DNA V2 pochodzi z polimerazy DNA I Bacillus stearothermophilus, która ma aktywność polimerazy DNA 5′ → 3′ i silną aktywność zastępowania łańcucha, ale nie ma aktywności egzonukleazy 5′ → 3′.Polimeraza DNA Bst V2 idealnie nadaje się do przemieszczania nici, amplifikacji izotermicznej LAMP (amplifikacja izotermiczna za pośrednictwem pętli) i szybkiego sekwencjonowania.Ta polimeraza DNA Bst V2 jest zdolna do hamowania aktywności polimerazy DNA w temperaturze pokojowej, dzięki czemu można ją eksploatować, a układ reakcyjny można formułować w temperaturze pokojowej, zapobiegając niespecyficznej amplifikacji i poprawiając wydajność reakcji, a ta wersja może być liofilizowany.Ponadto jest w stanie uwolnić swoją aktywność w podwyższonych temperaturach, eliminując w ten sposób potrzebę oddzielnego etapu aktywacji.
składniki
| Część | HC5007A-01 | HC5007A-02 | HC5007A-03 |
| Polimeraza DNA Bst V2 (bez glicerolu) (32U/μL) | 0,05 ml | 0,25 ml | 2,5 ml |
| Bufor 10×HC Bst V2 | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Aplikacje
1.Wzmocnienie izotermiczne LAMP
2.Reakcja pojedynczego przemieszczenia nici DNA
3.Sekwencjonowanie genów o wysokiej GC
4.Sekwencjonowanie DNA na poziomie nanogramów.
Stan przechowywania
Transportować w temperaturze poniżej 0°C i przechowywać w temperaturze -25°C ~ -15°C.
Definicja jednostki
Jedną jednostkę definiuje się jako ilość enzymu, która włącza 25 nmoli dNTP do materiału nierozpuszczalnego w kwasie w ciągu 30 minut w temperaturze 65°C.
Reakcja LAMPY
| składniki | 25 µlSystem |
| Bufor 10×HC Bst V2 | 2,5 µl |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 µl |
| dNTP (10 mM każdy) | 3,5 µl |
| SYTO™ 16 Zielony (25×)a | 1,0 µl |
| Mieszanka podkładowab | 6 µl |
| Bst DNA Polimeraza V2 (bez glicerolu) (32 U/uL) | 0,25 µl |
| Szablon | × µl |
| ddH₂O | Do 25 µL |
Uwagi:
1)SYTOTM 16 Zielony (25×): W zależności od potrzeb eksperymentalnych w zastępstwie można zastosować inne barwniki;
2) b.Mieszanka starterów: otrzymywana przez zmieszanie 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB i innych objętości.
Reakcja i stan
1 × bufor HC Bst V2, temperatura inkubacji wynosi od 60°C do 65°C.
Inaktywacja cieplna
80°C, 20 minut.
