Odczynnik uwalniający próbkę
Odczynnik do uwalniania próbki przeznaczony jest do molekularnych scenariuszy diagnostycznych POCT.W przypadku dwóch systemów bezpośredniej amplifikacji LAMP i bezpośredniej amplifikacji PCR nie ma potrzeby ekstrakcji kwasu nukleinowego.Surowy lizat próbki można bezpośrednio amplifikować, można dokładnie wykryć docelowy gen, a czas wykrywania próbki można dodatkowo skrócić, co doskonale odpowiada wymaganiom stosowania molekularnego POCT.Nadaje się do wymazów z nosa, wymazów z gardła i innych rodzajów próbek.Przetworzone próbki można bezpośrednio wykorzystać do ilościowego wykrywania fluorescencji metodą PCR lub LAMP w czasie rzeczywistym, a takie same wyniki, jak w przypadku konwencjonalnych metod ekstrakcji, można uzyskać bez skomplikowanych operacji ekstrakcji kwasów nukleinowych.
Warunki przechowywania
Transportować i przechowywać w temperaturze pokojowej.
Kontrola jakości
Detekcja funkcjonalna – ilościowa qPCR: System odczynnika do uwalniania próbki o pojemności 800 µl został amplifikowany
z 1000 kopiami nowego pseudowirusa, jedną próbką wymazu z nosa, co daje podobne krzywe amplifikacji iWartości ΔCt w zakresie ± 0,5 Ct.
Procedura eksperymentalnarez
1. Weź 800 μl odczynnika do uwalniania próbki i rozprowadź roztwór do lizy w probówce o pojemności 1,5 mL
2. Pobrać wymaz z nosa lub gardła wraz z wymazem. Procedura pobierania wymazu z nosa: pobrać sterylny wymaz do nozdrzy, powoli wsunąć go na głębokość około 1,5 cm, delikatnie obracać 4 razy w stronę błony śluzowej nosa przez ponad 15 sekund , następnie powtórz tę samą operację na drugiej jamie nosowej, używając tego samego wacika. Procedura pobierania wymazu z gardła: weź sterylny wymaz i delikatnie, szybko przetrzyj 3 razy migdałki gardłowe i tylną ścianę gardła.
3.Natychmiast umieścić wymazówkę w probówce do pobierania próbek.Głowicę wymazówki należy obracać i mieszać w roztworze do przechowywania przez co najmniej 30 sekund, aby upewnić się, że próbka została całkowicie wyeluowana w probówce do pobierania próbek.
4. Inkubacja w temperaturze pokojowej (20 ~ 25°C) przez 1 minutę, przygotowanie buforu do lizy jest zakończone.
5. Zarówno 25 μl systemu RT-PCR, jak i RT-LAMP były zgodne z 10 μl dodanej ilości matrycy do eksperymentów detekcji.
Notatki
1. Minimalną ilość bezpośredniego lizatu próbki odpowiadającą pojedynczemu wymazowi można ustawić na 400 μl, którą można dostosować do potrzeb badania.
2. Po przetworzeniu próbki przez odczynnik uwalniający próbkę, zaleca się jak najszybsze przeprowadzenie kolejnej fazy badania, okres oczekiwania powinien być krótszy niż 1 godzina.
3. pH lizatu próbki jest kwaśne, a system detekcji musi mieć określony bufor.Nadaje się do większości detekcji fluorescencji PCR, RT-PCR i LAMP z buforem pH, ale nie nadaje się do detekcji kolorymetrycznej LAMP bez buforu.
