Premiks sondy Multiplex qPCR
Nr kat.: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) to roztwór wstępny do 2 × ilościowej amplifikacji PCR w czasie rzeczywistym, charakteryzujący się wysoką czułością i swoistością, który ma kolor niebieski i powoduje efekt dodania próbki.Ten produkt jest wstępnie zmieszanym odczynnikiem 2× Mix, który umożliwia przeprowadzenie do czterech fluorescencyjnych ilościowych reakcji PCR w jednej studzience reakcyjnej.Ten produkt zawiera genetycznie zmodyfikowaną metodę przeciwciał do gorącego startu enzymu Taq, znacznie poprawiającą czułość i swoistość amplifikacji.Jednocześnie produkt ten głęboko zoptymalizował bufor wieloreakcyjny, co może poprawić wydajność amplifikacji reakcji i promować skuteczną amplifikację szablonów o niskim stężeniu.Produkt ten może być używany do genotypowania i multipleksowej analizy ilościowej.
Specyfikacja
| Gorący start | Wbudowany gorący start |
| Metoda wykrywania | Wykrywanie startera-sondy |
| Metoda PCR | qPCR |
| Polimeraza | Polimeraza DNA Taq |
| Rodzaj próbki | DNA |
Warunki przechowywania
Produkt jest dostarczany z suchym lodem i można go przechowywać w temperaturze -25 ~ -15 ℃ przez 2 lata.
Instrukcje
1. ReakcjaSystem
| składniki | Objętość (µL) | Końcowe stężenie |
| 2× TaqMan multipleks qPCR Master Mix | 12,5 | 1× |
| Mieszanka podkładów (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/l |
| Mieszanka sond (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/l |
| Barwnik referencyjny Rox | 0,5 | 1× |
| Szablon DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | do 25 | - |
Uwagi:Dokładnie wymieszać przed użyciem, aby uniknąć nadmiernych pęcherzyków powietrza w wyniku energicznego wstrząsania.
A.Stężenie startera: Primer Mix zawiera wiele par starterów, zwykle każdy starter o końcowym stężeniu 0,2 μmol/L, które można również regulować w zakresie od 0,1 do 0,5 μmol/L, stosownie do potrzeb.
B.Stężenie sondy: Probe Mix zawiera wiele sond o różnych sygnałach fluorescencji, a stężenie każdej sondy można regulować w zakresie od 50 do 250 nmol/l w zależności od konkretnej sytuacji.
1.Odniesienie do barwnika Rox: Jest stosowany w aparacie do amplifikacji PCR w czasie rzeczywistym, takim jak Applied Biosystems, w celu skorygowania błędu sygnału fluorescencji generowanego pomiędzy dołkami;ten produkt nie zawiera odniesienia do barwnika Rox.W razie potrzeby zaleca się Cas#10200.
2.Rozcieńczanie szablonu: qPCR jest bardzo czuły i zaleca się rozcieńczenie szablonu przed użyciem.Jeśli matrycą jest roztwór podstawowy cDNA, objętość matrycy nie powinna przekraczać 1/10 całkowitej objętości.
3.Układ reakcyjny: Zalecane jest 25 μL, 30 μL lub 50 μL, aby zapewnić skuteczność i powtarzalność amplifikacji genu docelowego.
4.Przygotowanie systemu: Proszę przygotować na super czystym stole i używać końcówek i probówek reakcyjnych bez pozostałości nukleaz;zaleca się stosowanie końcówek z wkładami filtrującymi.Unikać zanieczyszczenia krzyżowego i zanieczyszczenia aerozolem.
2.Program reakcji
| Krok cyklu | Temp. | Czas | Cykle |
| Początkowa denaturacja | 95 ℃ | 5 minut | 1 |
| Denaturacja | 95 ℃ | 15 sek | 45 |
| Wyżarzanie/Wydłużanie | 60 ℃ | 30 sek |
Uwagi:
1.Wyżarzanie/Wydłużanie: Temperaturę i czas można odpowiednio dostosować w zależności od zaprojektowanej wartości Tm podkładu.
2.Akwizycja sygnału fluorescencji: Czas akwizycji sygnału fluorescencji wymagany dla różnych przyrządów do detekcji qPCR jest inny, należy ustawić zgodnie z minimalnym limitem czasu.Czas kilku wspólnych instrumentów ustala się w następujący sposób:
20 s: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sek: Applied Biosystems 7300
32 s: Applied Biosystems 7500
Notatki
Aby zapewnić sobie zdrowie i bezpieczeństwo, należy nosić niezbędne środki ochrony indywidualnej, takie jak fartuch laboratoryjny i rękawiczki!
