Multipleksowy jednoetapowy premiks RT-qPCR-UNG
Nr kat.: HCB5145A
Zestaw Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) to multipleksowy zestaw ilościowy do PCR oparty na RNA jako matrycy.W trakcie eksperymentu w tej samej probówce przeprowadzono odwrotną transkrypcję i ilościową PCR, co uprościło operację eksperymentu i zmniejszyło ryzyko skażenia.W tym zestawie pierwszą nić cDNA skutecznie zsyntetyzowano za pomocą odpornej na ciepło odwrotnej transkryptazy i ilościowo amplifikowano za pomocą polimerazy DNA HotStart Tag.Zestaw zawiera głównie zoptymalizowany bufor MP, mieszankę enzymów itp. Roztwór buforowy zawiera już Mg2+i dNTP.Ponadto dodano czynniki, które mogą skutecznie hamować nieswoistą amplifikację PCR i poprawiać wydajność amplifikacji wielu reakcji qPCR, co może zapewnić wydajność amplifikacji i przeprowadzić aż do reakcji wielokrotnej amplifikacji.Aby skutecznie zapobiegać ryzyku skażenia aerozolem, dodano system dUTP/UDG.
składniki
1. Bufor
2. Mieszanka enzymów
Specyfikacja
| Gorący start | Wbudowany gorący start |
| Metoda wykrywania | Wykrywanie startera-sondy |
| Metoda PCR | Jednoetapowy RT-qPCR |
| Polimeraza | Polimeraza DNA Taq |
| Rodzaj próbki | DNA |
Warunki przechowywania
Produkt jest dostarczany z suchym lodem i można go przechowywać w temperaturze -25 ~ -15 ℃ przez 1 rok.Należy unikać częstychzamrażanie-rozmrażanie.Zaleca się zapisywanie osobno.
Instrukcje
1.Reakcja System
| składniki | Objętość (µL) | Końcowe stężenie |
| 2 × bufor MP | 12,5 | 1× |
| Mieszanka enzymów | 1 | - |
| Mieszanka startera/sondy (2,5 µM) | 3 | 0,3μM |
| Szablon RNA | 1-10 | - |
| H2O wolna od RNaz | do 25 | - |
Uwagi:
Przed użyciem należy dobrze wymieszać, unikać nadmiernych pęcherzyków powietrza spowodowanych gwałtownymi wibracjami.
A.Stężenie podkładu: Mieszanka podkładów zawierająca podkład multipleksowy, w zależności od sytuacji optymalne stężenie podkładu może wynosić od 0,1 do 1,0 µM.
B.Stężenie sondy: Mieszanka sond zawierająca różnicę w znakowaniu sondy multipleksowej, grupa fluorescencyjna, w zależności od sytuacji optymalne stężenie sondy może wynosić od 0,05 do 0,5 μM.
C.Rozcieńczanie szablonu: qPCR jest bardzo czuły i zaleca się rozcieńczenie szablonu.Wartość Ct sterowania powinna wynosić od 20 do 35.
D.Przygotowanie systemu: Proszę przygotować na ultra czystym stole roboczym, pipetorze i probówce reakcyjnej bez pozostałości nukleazy;zaleca się stosowanie głowicy pistoletu z wkładem filtrującym.Unikać zanieczyszczenia krzyżowego i zanieczyszczenia aerozolem.
2. Zoptymalizowana jazda na rowerzeProtokół
| Cykl krok | Temp. | Czas | Cykle |
| Transkrypcja odwrotna | 50 ℃A | 20 minut | 1 |
| Początkowa denaturacja | 95 ℃ | 5 minut | 1 |
| Reakcja amplifikacji | 95 ℃ | 15 sek |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 sek c |
Uwagi:
A.Odwrotna transkrypcja: Temperatura może wynosić 42°C lub 50°C.
B.Reakcja amplifikacji: Temperaturę dostosowuje się w zależności od wartości Tm zaprojektowanych starterów.
C.Pozyskiwanie sygnału fluorescencji: Ustaw procedurę eksperymentalną zgodnie z wymaganiami instrukcji instrumentu.
Notatki
Aby zapewnić sobie zdrowie i bezpieczeństwo, należy nosić niezbędne środki ochrony indywidualnej, takie jak fartuch laboratoryjny i rękawiczki.
