Master Mix kolorymetryczny RT-LAMP HCB5204A
Ten produkt zawiera bufor reakcyjny, mieszankę enzymów RT (polimeraza DNA Bst i odporna na ciepło odwrotna transkryptaza), liofilizowane środki ochronne i chromogenne składniki barwników.Aby użyć, wystarczy użyć Buffera, enzym reakcyjny i starter miesza się i dodaje do szablonu;dodanie liofilizowanego środka ochronnego może być proste.Podłączono go do liofilizatora i liofilizowano, a w momencie użycia dodano jedynie startery i matryce.Zestaw ten umożliwia szybkie i wyraźne wizualne wykrywanie wzmocnienia, którego reakcja ujemna jest oznaczona kolorem czerwonym, a reakcja pozytywna zmianą koloru na żółty.
Część
| Część | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Bufor do amplifikacji za pośrednictwem pętli (z barwnikiem) | 0,96 ml | 4,80 ml×2 | 9,60 ml×10 |
| Mieszanka enzymów RT | 270 µl | 2,70 ml | 2,70 ml×10 |
| Liofilizowany środek ochronny | 0,96 ml×2 | 9,60 ml×2 | 9,60 ml×20 |
Aplikacje
Do izotermicznej amplifikacji DNA lub RNA.
Warunki przechowywania
Transportowany suchym lodem, przechowywany w temperaturze -25 ~ -15 ℃.Unikać częstego zamrażania i rozmrażania, produkt jest ważny 12 miesięcy.
Protokół
1.Rozmrozić bufor reakcyjny, który ma być użyty, w temperaturze pokojowej.Krótko wiruj lub odwracaj probówki kilka razy, aby dokładnie wymieszać, a następnie odwiruj, aby zebrać płyn na dnie probówki.
2.Przygotowanie układu reakcyjnego.Odczynnik ten można przygotować w dwóch układach reakcyjnych, ciekłej mieszance reakcyjnej i liofilizowanej mieszaninie układowej.
1) Przygotuj płynną mieszaninę reakcyjną
| Część | Tom |
| Bufor do amplifikacji za pośrednictwem pętli (z barwnikiem) | 10 µL |
| Mieszanka enzymów RT | 2,8 µl |
| 10 × Mieszanka podkładowaa | 5 µL |
| Szablony DNA/RNA b | × µl |
| Woda wolna od nukleaz | Do 50 µl |
2) Mieszanka systemu liofilizacji
① Przygotuj liofilizowaną mieszankę
| Część | Tom |
| Bufor do amplifikacji za pośrednictwem pętli (z barwnikiem) | 10 µL |
| Liofilizowany środek ochronny | 20 µL |
| Mieszanka enzymów RT | 2,8 µl |
| Woda wolna od nukleaz | Do 50 µl |
② Liofilizacja: Przygotowaną Mieszankę liofilizowano w układzie 50µL
③ Przygotuj mieszaninę reakcyjną
| Część | Tom |
| Mieszanka liofilizowana | 1 kawałek |
| 10 × Mieszanka podkładowaa | 5 µL |
| Szablony DNA/RNA b | × µl |
| Woda wolna od nukleaz | Do 50 µl |
Uwagi:
1)10×Mieszanka podkładu: 16 µM FIP/BIP, 2 µM F3/B3, 4 µM Loop F/B;
2) b.DEPC (rozpuszczalny w wodzie) jest zalecany do temp. kwasu nukleinowego.
1.Inkubować w temperaturze 65°C przez 30–45 minut, który można odpowiednio wydłużyć w zależności od zmiany koloru. Czas reakcji.
2.Gołym okiem widać, że żółty jest pozytywny, a czerwony negatywny.
Notatki
1.Na dnie probówki z buforem może pojawić się sól, należy ją krótko wymieszać lub odwrócić kilka razy, aby dokładnie wymieszać w temperaturze pokojowej.
2.Temperaturę reakcji można optymalizować w zakresie od 62 ℃ do 68 ℃ w zależności od stanu podkładów.
3.Zapakowane odczynniki nie powinny być wystawiane na działanie powietrza przez dłuższy czas.
4.Reakcja odbarwienia na czerwono i żółto zależy od zmiany pH układu reakcyjnego, proszę nie używać roztworu do przechowywania kwasu nukleinowego zawierającego Tris, zalecane jest użycie ddH2O zmagazynowany kwas nukleinowy;
5.Eksperyment powinien zostać ujednolicony, obejmujący przygotowanie układu reakcyjnego, liofilizację oraz proces obróbki i dodawania próbki;
6.Aby uniknąć zanieczyszczenia, zaleca się przygotowanie układu reakcyjnego na ultra czystym stole laboratoryjnym, w innym miejscu. Dodaj szablony do wyciągu w pomieszczeniu, aby uniknąć fałszywie dodatnich zakłóceń.
