Ultranukleaza
UltraNuclease to genetycznie zmodyfikowany endonukleaz pochodzący z Serratia marcescens, który jest zdolny do degradacji DNA lub RNA, dwu- lub jednoniciowego, liniowego lub kolistego w szerokim zakresie warunków, całkowicie rozkłada kwasy nukleinowe do oligonukleotydów 5'-monofosforanowych o długości 3-5 zasad .Po modyfikacji inżynierii genetycznej produkt poddano fermentacji, ekspresji i oczyszczeniu w Escherichia coli (E. coli), co zmniejsza lepkość supernatantu komórkowego i lizatu komórkowego, ale także poprawia skuteczność oczyszczania i badania funkcjonalne białka.Można go również stosować w terapii genowej, oczyszczaniu wirusów, produkcji szczepionek, przemyśle farmaceutycznym białek i polisacharydów jako odczynnik do usuwania reszt kwasu nukleinowego gospodarza.
Cechy produktu
| Nr CAS | 9025-65-4 |
| Nr WE | |
| Waga molekularna | 30kDa |
| Punkt izoelektryczny | 6,85 |
| Czystość białka | ≥99% (SDS-PAGE i SEC-HPLC) |
| Konkretna czynność | ≥1.1×106U/mg |
| Optymalna temperatura | 37°C |
| Optymalne pH | 8,0 |
| Aktywność proteazy | negatywny |
| Obciążenie biologiczne | ＜10CFU/100 000U |
| Resztkowe białko komórki gospodarza | ≤10 ppm |
| Ciężkiego metalu | ≤10 ppm |
| Endotoksyna bakteryjna | <0,25EU/1000U |
| Bufor magazynowy | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% gliceryna |
Warunki przechowywania
Transport ≤0°C；-25~-15°C Przechowywanie, ważność 2 lata (unikać zamrażania-rozmrażania).
Definicja jednostki
Ilość enzymu użytego do zmiany wartości absorpcji △A260 o 1,0 w ciągu 30 minut w temperaturze 37°C, pH 8,0, równoważnej strawieniu 37 µg DNA plemnika łososia przez pocięcie na oligonukleotydy, zdefiniowano jako jednostkę aktywną (U).
Kontrola jakości
Resztkowe białko komórki gospodarza: Zestaw ELISA
•Proteaza Pozostałości: 250KU/ml UltraNuclease reagowało z substratem przez 60 minut, nie wykryto żadnej aktywności.
•Endotoksyna bakteryjna: LAL-Test, Farmakopea Chińskiej Republiki Ludowej, tom 4 (wydanie 2020), metoda testu żelowego.Zasady ogólne (1143).
•Obciążenie biologiczne: Farmakopea Chińskiej Republiki Ludowej, tom 4 (wydanie 2020) — Ogólne
Zasady testu sterylności (1101), norma krajowa PRC, GB 4789.2-2016.
•Ciężkiego metalu:ICP-AES, HJ776-2015.
Operacja
Aktywność UltraNucleazy była znacząco hamowana, gdy stężenie SDS lub EDTA przekraczało 0,1%.
stężenie przekraczało 1 mM. Środek powierzchniowo czynny Triton X-100, Tween 20 i Tween 80 nie miały wpływu na nukleazę
właściwości, gdy stężenie było poniżej 1,5%.
| Operacja | Optymalne działanie | Prawidłowa operacja |
| Temperatura | 37 ℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| NTC | 0-100 mM | >100 mM |
| 2-merkaptoetanol | 0-100 mM | >100 mM |
| Jednowartościowy jon metalu (Na+, K+ itp.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Stosowanie i dawkowanie
• Usunąć egzogenny kwas nukleinowy z produktów szczepionkowych, zmniejszyć ryzyko toksyczności resztkowej kwasu nukleinowego i poprawić bezpieczeństwo produktu.
• Zmniejsza lepkość cieczy zasilającej spowodowaną kwasem nukleinowym, skraca czas przetwarzania i zwiększa uzysk białka.
• Usuń kwas nukleinowy, który owinął cząstkę (wirus, ciałko inkluzyjne itp.), który przewodzi
do uwolnienia i oczyszczenia cząstki.
| Typ eksperymentalny | Produkcja białka | Wirus, szczepionka | Leki komórkowe |
| Liczba komórek | 1 g mokrej masy komórek (zawieszony w 10 ml buforu) | Fermentacja 1L płynny supernatant | Kultura 1L |
| Minimalne dawkowanie | 250U | 100 U | 100 U |
| Rekomendowana dawka | 2500U | 25000U | 5000U |
• Traktowanie nukleazami może poprawić rozdzielczość i odzysk próbki do chromatografii kolumnowej, elektroforezy i analizy blottingu.
• W terapii genowej kwas nukleinowy jest usuwany w celu uzyskania oczyszczonych wirusów związanych z adenowirusami.
