Enzymy UDG/UNG
UDG (glikozylaza DNA uracylu) może katalizować hydrolizę wiązania N-glikozydowego pomiędzy zasadą uracylu a szkieletem cukrowo-fosforanowym w ssDNA i dsDNA.Może z łatwością kontrolować zanieczyszczenie aerozolami i nadaje się do popularnych systemów biologii molekularnej, takich jak PCR, qPCR, RT-qPCR i LAMP.
Dane techniczne
| Host wyrażeń | Rekombinowana E. coli z genem glikozylazy DNA uracylu |
| Waga molekularna | 24.8kDa |
| Czystość | ≥95% (STRONA SDS) |
| Inaktywacja cieplna | 95 ℃, 5 ~ 10 min |
| Definicja jednostki | Jedną jednostkę (U) definiuje się jako ilość enzymu wymaganą do katalizowania hydrolizy 1 μg dsDNA zawierającego dU w ciągu 30 minut w temperaturze 25°C. |
Składowanie
Produkt należy przechowywać w temperaturze -25℃~-15°C przez dwa lata.
Instrukcje
1.Przygotowanie mieszaniny reakcyjnej PCR według następującego systemu
| składniki | Objętość (µL) | Końcowe stężenie |
| 10×bufor do PCR (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/l |
| dUTP(10 mmol/l) | 3 | 0,6 mmola/l |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/ługowanie) | 1 | 0,2 mmol/ługowanie |
| Szablon DNA | X | - |
| Podkład1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/l |
| Podkład 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/l |
| Polimeraza DNA Taq (5 U/μL) | 0. 5 | 0,05 U/µL |
| Glikozylaza DNA uracylu (UDG/UNG), 1 U/µL | 1 | 1 U/µL |
| ddH₂O | Do 50 | - |
Notatka: Zgodnie z wymaganiami doświadczalnymi, końcowe stężenie dUTP można regulować w zakresie 0,2-0,6 mmol/l, a selektywnie można dodać 0,2 mmol/l dTTP.
2.Procedura amplifikacji
| Krok cyklu | Temperatura | Czas | Cykle |
| Degradacja szablonu zawierającego dU | 25 ℃ | 10 minut | 1 |
| Aktywacja UDG, początkowa denaturacja szablonu | 95 ℃ | 5 ~ 10 minut | 1 |
| Denaturacja | 95 ℃ | 10 sek |
30-35 |
| Wyżarzanie | 60 ℃ | 20 sek | |
| Rozszerzenie | 72 ℃ | 30 sek./kb | |
| Ostateczne przedłużenie | 72 ℃ | 5 minut | 1 |
Notatka: Czas reakcji w temperaturze 25°C można regulować w ciągu 5-10 minut, zgodnie z wymaganiami doświadczalnymi.
Notatki
1.UDG jest aktywny w większości buforów do reakcji PCR.
2.Enzymy należy przechowywać w lodówce lub na łaźni lodowej, gdy są używane, a bezpośrednio po użyciu należy je przechowywać w temperaturze -20°C.
3.Aby zapewnić sobie zdrowie i bezpieczeństwo, należy nosić niezbędne środki ochrony indywidualnej, takie jak fartuch laboratoryjny i rękawiczki!
