BspQI
BspQI może ulegać rekombinacyjnej ekspresji w E. coli, która potrafi rozpoznawać określone miejsca i jest w nich wytwarzana
BspQI, endonukleaza restrykcyjna endonukleazy restrykcyjnej IIs, pochodzi z rekombinowanego szczepu E. coli niosącego sklonowany i zmodyfikowany gen BspQI z Bacillus sphaericus.Potrafi rozpoznać określone miejsca, a sekwencja rozpoznawania i miejsca rozszczepienia są następujące:
5' · · · ·OWCTCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
cechy produktu
1. Wysoka aktywność, szybkie trawienie;
2. Niska aktywność gwiazdy, zapewniająca dokładne cięcie jak „skalpel”;
3. Bez BSA i pochodzenia zwierzęcego;
Czułość na metylację
Djestem metylacją:Niewrażliwy;
Dcm metylacja:Niewrażliwy;
Metylacja CpG:Niewrażliwy;
Warunki przechowywania
Produkt powinien zostać wysłany ≤ 0 ℃;Przechowywać w temperaturze -25 ~ - 15 ℃.
Bufor do przechowywania
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM ditiotreitol, 500 µg/ml rekombinowanej albuminy, 0,1% Trition X-100 i 50% gliceryny (pH 7,0 @ 25°C).
Definicja jednostki
Jedną jednostkę definiuje się jako ilość enzymu wymaganą do strawienia 1 µg DNA kontroli wewnętrznej w ciągu 1 godziny w temperaturze 50°C w całkowitej objętości reakcji wynoszącej 50 µl.
Kontrola jakości
Test czystości białka (SDS-PAGE):Czystość BspQI wynosiła ≥95%, co określono za pomocą analizy SDS-PAGE.
RNaza:10 U BspQI z 1,6 µg RNA MS2 przez 4 godziny w temperaturze 50°C nie powoduje degradacji, jak określono metodą elektroforezy w żelu agarozowym.
Niespecyficzna aktywność DNazy:10 U BspQI z 1 µg λ DNA w temperaturze 50°C przez 16 godzin, w porównaniu z 50°C przez 1 godzinę, nie daje nadmiaru DNA, jak określono metodą elektroforezy w żelu agarozowym.
Podwiązanie i ponowne docięcie:Po trawieniu 1 µg λDNA 10U BspQI, fragmenty DNA można zligować ligazą DNA T4 w temperaturze 16°C.Te zligowane fragmenty można ponownie wyciąć za pomocą BspQI.
E coli DNA: Detekcja TaqMan qPCR specyficzna dla rDNA E. coli 16s wykazała, że reszta genomu E. coli ≤ 0,1 pg/ul.
Pozostałość białka gospodarza:≤ 50 ppm
Bakteryjny Endotoksyna: Test LAL, zgodnie z Farmakopeą Chińską, wydanie IV 2020, metoda testu żelowego, zasada ogólna (1143).Zawartość endotoksyn bakteryjnych powinna wynosić ≤10 EU/mg.
Układ i warunki reakcji
| Część | Tom |
| BspQ I (10 U/µL) | 1 µl |
| DNA | 1 mg |
| 10 x bufor BspQ I | 5 µL |
| dd H2O | Do 50 µl |
Warunki reakcji: 50 ℃, 1 ~ 16 godz.
Inaktywacja cieplna: 80°C przez 20 min.
Zalecany układ reakcji i warunki mogą zapewnić stosunkowo dobry efekt trawienia enzymatycznego, który ma jedynie charakter informacyjny. Aby uzyskać szczegółowe informacje, zapoznaj się z wynikami eksperymentów.
Sposób nakładania produktu
Trawienie endonukleazą restrykcyjną, Szybkie klonowanie.
Notatki
1. Objętość enzymu ≤ 1/10 objętości reakcji.
2. Aktywność gwiazdowa może wystąpić, gdy stężenie glicerolu przekracza 5%.
3. Aktywność rozszczepiania może wystąpić, gdy podłoże jest poniżej zalecanego stosunku.
