Polimeraza DNA Bst 2.0 (bez gliceryny)
Bst polimeraza DNA V2 pochodzi z polimerazy DNA I Bacillus stearothermophilus, która ma aktywność polimerazy DNA 5′ → 3′ i silną aktywność zastępowania łańcucha, ale nie ma aktywności egzonukleazy 5′ → 3′.Polimeraza DNA Bst V2 idealnie nadaje się do przemieszczania nici, amplifikacji izotermicznej LAMP (amplifikacja izotermiczna za pośrednictwem pętli) i szybkiego sekwencjonowania.
składniki
| Część | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| Polimeraza BstDNA V2 (bez gliceryny) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| Bufor 10×HC Bst V2 | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Aplikacje
1. Wzmocnienie izotermiczne LAMPY
2.Reakcja przemieszczenia pojedynczej nici DNA
3. Sekwencjonowanie genów wysokiego GC
4.Sekwencjonowanie DNA na poziomie nanogramów.
Stan przechowywania
Transportować w temperaturze poniżej 0°C i przechowywać w temperaturze -25°C ~ -15°C.
Definicja jednostki
Jedną jednostkę definiuje się jako ilość enzymu, która włącza 25 nmoli dNTP do materiału nierozpuszczalnego w kwasie w ciągu 30 minut w temperaturze 65°C.
Kontrola jakości
1.Test czystości białka (SDS-PAGE):Czystość polimerazy DNA Bst V2 wynosi ≥99%, co określono metodą analizy SDS-PAGE z zastosowaniem detekcji Coomassie Blue.
2.Aktywność egzonukleazy:Inkubacja 50 µl mieszaniny reakcyjnej zawierającej minimum 8 U polimerazy DNA Bst V2 z 1 µg DNA trawionego λ-Hind Ⅲ przez 16 godzin w temperaturze 37°C nie powoduje wykrywalnej degradacji, jak określono.
3.Aktywność Nickase'a:Inkubacja 50 µl mieszaniny reakcyjnej zawierającej co najmniej 8 U polimerazy DNA Bst V2 z 1 µg DNA pBR322 przez 16 godzin w temperaturze 37°C nie powoduje wykrywalnej degradacji, jak określono.
4.Aktywność RNazy:Inkubacja 50 µl mieszaniny reakcyjnej zawierającej co najmniej 8 U polimerazy DNA Bst V2 z 1,6 µg RNA MS2 przez 16 godzin w temperaturze 37°C nie powoduje wykrywalnej degradacji, jak określono.
5.DNA E. coli:120 U polimerazy DNA Bst V2 przeszukuje się pod kątem obecności genomowego DNA E. coli przy użyciu TaqMan qPCR ze starterami specyficznymi dla locus 16S rRNA E. coli.Zanieczyszczenie genomowym DNA E. coli wynosi ≤1 kopia.
Reakcja LAMPY
| składniki | 25µl |
| Bufor 10×HC Bst V2 | 2,5 µl |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 µl |
| dNTP (10 mM każdy) | 3,5 µl |
| SYTO™ 16 Zielony (25×)a | 1,0 µl |
| Mieszanka podkładowab | 6 µl |
| Bst DNA Polimeraza V2 (bez glicerolu) (8 U/uL) | 1 µl |
| Szablon | × µl |
| ddH₂O | Do 25 µL |
Uwagi:
1)SYTOTM 16 Zielony (25×): W zależności od potrzeb eksperymentalnych w zastępstwie można zastosować inne barwniki;
2) b.Mieszanka podkładów: otrzymywana przez zmieszanie 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB i innych objętości.
Reakcja i stan
1 × bufor HC Bst V2, temperatura inkubacji wynosi od 60°C do 65°C.
Inaktywacja cieplna
80°C, 20 minut
