DNaza I (wolna od Rnazy) (5u/ul)
Nr kat.: HC4007A
DNaza I (deoksyrybonukleaza I) to endodeoksyrybonukleaza, która może trawić jedno- lub dwuniciowy DNA.Rozpoznaje i rozszczepia wiązania fosfodiestrowe, tworząc monodeoksynukleotydy lub jedno- lub dwuniciowe oligodeoksynukleotydy z grupami fosforanowymi na 5'-końcu i hydroksylowymi na 3'-końcu.Aktywność DNazy I zależy od Ca2+i może być aktywowany przez jony metali dwuwartościowych, takich jak Mn2+i Zn2+.5 mM ok2+chroni enzym przed hydrolizą.W obecności Mg2+enzym mógłby losowo rozpoznać i przeciąć dowolne miejsce na dowolnej nici DNA.W obecności Mn2+, podwójne nici DNA można jednocześnie rozpoznać i rozciąć w prawie tym samym miejscu, tworząc fragmenty DNA o płaskich końcach lub fragmenty DNA o lepkich końcach z wystającymi 1-2 nukleotydami.
składniki
| Nazwa | 0,1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNaza I, wolna od RNazy | 20µL | 200µL | 1ml | 10 ml |
| 10 x bufor DNazy I | 1ml | 1ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Warunki przechowywania
-25 ℃ ~ -15 ℃ do przechowywania;Transport pod okładami z lodu.
Instrukcje
1. Przygotować roztwór reakcyjny w probówce wolnej od RNazy w podanych poniżej proporcjach:
| Część | Tom |
| RNA | X µg |
| 10 x bufor DNazy I | 1µl |
| DNaza I, wolna od RNazy (5U/μL) | 1 U na µg RNA① |
| ddH2O | Do 10μl |
Uwaga: ①Obliczyć objętość DNazy I, którą należy dodać, w oparciu o ilość RNA.
2. 37 ℃ przez 15 minut;
3. Dodaj 0,5 M EDTA do końcowego stężenia 2,5 mM ~ 5 mM i ogrzewaj w temperaturze 65°C przez 10 minut, aby zatrzymać reakcję.Próbkę można bezpośrednio wykorzystać w następnej reakcji, takiej jak odwrotna transkrypcjaeksperyment.
Definicja jednostki
Jedną jednostkę definiuje się jako ilość enzymu, która całkowicie rozkłada 1 µg pBR322DNA w 10 minut w temperaturze 37℃.
Kontrola jakości
RNaza:5U DNazy I z 1,6 µg RNA MS2 przez 4 godziny w temperaturze 37°C nie powoduje degradacji, ponieważoznaczane metodą elektroforezy w żelu agarozowym.
Notatki
1. Proszę samodzielnie przygotować 0,5 MEDTA.
2. Użyj 1U DNazy I na µg RNA.Jeśli jednak RNA jest mniejsze niż 1 µg, należy użyć 1U DNazy I.
3. Podczas pracy umieść enzym na lodzie.
