Zestaw do genotypowania myszy

Nr kat.: HCR2021A

Ten produkt to zestaw przeznaczony do szybkiej identyfikacji genotypów myszy, obejmujący ekstrakcję surowego DNA i system amplifikacji PCR.Produkt może być stosowany do amplifikacji PCR bezpośrednio z mysiego ogona, ucha, palca u nogi i innych tkanek po prostym rozszczepieniu za pomocą buforu lizującego i proteinazy k.Bez trawienia przez noc, ekstrakcji fenolem i chloroformem czy oczyszczania na kolumnie, co jest proste i skraca czas eksperymentów.Produkt nadaje się do amplifikacji fragmentów docelowych do 2 kb i multipleksowych reakcji PCR z maksymalnie 3 parami starterów.Mieszanka 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix zawiera genetycznie modyfikowaną polimerazę DNA, Mg²⁺, dNTP i zoptymalizowany układ buforów zapewniający wysoką wydajność amplifikacji i tolerancję na inhibitory, dzięki czemu reakcje PCR można przeprowadzić poprzez dodanie matrycy i starterów oraz ponowne uwodnienie produktu do 1×.Produkt PCR amplifikowany tym produktem ma wyraźną zasadę „A” na końcu 3′ i po oczyszczeniu może być użyty bezpośrednio do klonowania TA.

składniki

Warunki przechowywania

Produkty należy przechowywać w temperaturze -25 ~ -15 ℃ przez 2 lata.Po rozmrożeniu bufor lizujący można przechowywać w temperaturze 2 ~ 8 ℃ do krótkotrwałego wielokrotnego użycia i dobrze wymieszać podczas użycia.

Aplikacja

Ten produkt nadaje się do analizy nokautu myszy, wykrywania transgenicznego, genotypowania i tak dalej.

Cechy

1.Prosta obsługa: nie ma potrzeby ekstrakcji genomowego DNA;

2.Szerokie zastosowanie: odpowiednie do bezpośredniej amplifikacji różnych tkanek myszy.

Instrukcje

1.Uwalnianie genomowego DNA

1) Przygotowanie lizatu

Lizat tkankowy przygotowuje się w zależności od liczby próbek myszy przeznaczonych do lizy (lizat tkankowy należy przygotować na miejscu zgodnie z dawką i dokładnie wymieszać przed użyciem), a proporcja odczynników wymaganych do pojedynczej próbki jest następująca:

2) Przygotowanie próbki i liza

Zalecane użycie tkanki

Pobrać odpowiednią ilość próbek tkanek myszy do czystych probówek wirówkowych, dodać 200 µl świeżego lizatu tkanek do każdej probówki wirówkowej, wymieszać i wstrząsnąć, następnie inkubować w temperaturze 55°C przez 30 minut, a następnie ogrzewać w temperaturze 98°C przez 3 minuty.

3) Wirowanie

Dobrze wstrząśnij lizatem i wiruj przy 12 000 obr./min przez 5 minut.Supernatant można zastosować jako matrycę do amplifikacji PCR.Jeśli szablon jest potrzebny do przechowywania, przenieś supernatant do innej sterylnej probówki wirówkowej i przechowuj w temperaturze -20°C przez 2 tygodnie.

2.Amplifikacja PCR

Wyjąć 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix z -20°C i rozmrozić na lodzie, wymieszać do góry nogami i przygotować układ reakcji PCR zgodnie z poniższą tabelą (działać na lodzie):

Notatka:

a) Dodana ilość nie powinna przekraczać 1/10 układu, a jeśli zostanie dodana zbyt duża ilość, amplifikacja PCR może zostać zahamowana.

Zalecane warunki PCR

Notatka:

a) Temperatura wyżarzania: W odniesieniu do wartości Tm podkładu zaleca się ustawienie temperatury wyżarzania na niższą wartość Tm podkładu +3~5℃.

Typowe problemy i rozwiązania

1.Brak ukierunkowanych pasków

1) Nadmiar produktu lizy.Wybierz najbardziej odpowiednią ilość szablonu, zwykle nie większą niż 1/10 układu;

2) Zbyt duża wielkość próby.Rozcieńczyć lizat 10 razy, a następnie amplifikować lub zmniejszyć wielkość próbki i przeprowadzić ponowną lizę;

3) Próbki tkanek nie są świeże.Zaleca się stosowanie świeżych próbek tkanek;

4) Zła jakość podkładu.Użyj genomowego DNA do amplifikacji, aby zweryfikować jakość startera i zoptymalizować projekt startera.

2.Amplifikacja niespecyficzna

1) Temperatura wyżarzania jest zbyt niska, a liczba cykli jest zbyt wysoka.Zwiększ temperaturę wyżarzania i zmniejsz liczbę cykli;

2) Stężenie szablonu jest zbyt wysokie.Po amplifikacji zmniejszyć ilość szablonu lub rozcieńczyć szablon 10 razy;

3) Słaba specyficzność startera.Zoptymalizuj projekt podkładu.

Notatki

1.Aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego próbek, należy przygotować wiele narzędzi do pobierania próbek, a powierzchnię narzędzi można oczyścić 2% roztworem podchlorynu sodu lub środkiem czyszczącym na bazie kwasu nukleinowego po każdym pobraniu próbki, jeśli wymagane jest wielokrotne użycie.

2.Zaleca się stosowanie świeżych tkanek myszy, a objętość próbki nie powinna być zbyt duża, aby uniknąć wpływu na wyniki amplifikacji.

3.Bufor do lizy powinien unikać częstego zamrażania i rozmrażania i można go przechowywać w temperaturze 2 ~ 8 ℃ do krótkotrwałego wielokrotnego użycia.W przypadku przechowywania w niskiej temperaturze może nastąpić wytrącenie osadu, który przed użyciem musi zostać całkowicie rozpuszczony.

4.Mieszankę PCR należy unikać częstego zamrażania i rozmrażania i można ją przechowywać w temperaturze 4°C w celu krótkotrwałego wielokrotnego użycia.

5.Ten produkt jest przeznaczony wyłącznie do naukowych badań eksperymentalnych i nie powinien być używany w diagnostyce klinicznej ani leczeniu.