Zestaw do ekstrakcji wirusowego DNA/RNA
Zestaw ten nadaje się do szybkiej ekstrakcji wirusowego DNA/RNA o wysokiej czystości z próbek, takich jak wymazy z nosogardzieli, wymazy z otoczenia, supernatanty hodowli komórkowych i supernatanty homogenatów tkankowych.Zestaw oparty jest na technologii oczyszczania membraną krzemionkową, która eliminuje potrzebę stosowania rozpuszczalników organicznych w postaci fenolu/chloroformu lub czasochłonnego wytrącania alkoholem w celu ekstrakcji wirusowego DNA/RNA o wysokiej jakości.Otrzymane kwasy nukleinowe są wolne od zanieczyszczeń i gotowe do użycia w dalszych eksperymentach, takich jak odwrotna transkrypcja, PCR, RT-PCR, PCR w czasie rzeczywistym, sekwencjonowanie nowej generacji (NGS) i hybrydyzacja Northern.
Warunki przechowywania
Przechowywać w temperaturze 15 ~ 25 ℃ i transportować w temperaturze pokojowej
składniki
| składniki | 100RXNS |
| Bufor VL | 50 ml |
| Bufor RW | 120 ml |
| Wolny od RNazy ddH2 O | 6ml |
| Kolumny FastPure RNA | 100 |
| Probówki zbiorcze (2ml) | 100 |
| Probówki do pobierania wolne od RNaz (1,5 ml) | 100 |
Bufor VL:Zapewnij środowisko do lizy i wiązania.
Bufor RW:Usuń resztki białek i inne zanieczyszczenia.
ddH2O wolny od RNazy:Wyeluuj DNA/RNA z membrany w kolumnie wirówkowej.
Kolumny FastPure RNA:Specyficznie adsorbują DNA/RNA.
Kolekcja Tuby 2 ml:Zbierz filtrat.
Probówki do pobierania wolne od RNaz 1,5 ml:Zbierz DNA/RNA.
Aplikacje
Wymazy z nosogardła, wymazy ze środowiska, supernatanty z hodowli komórkowych i supernatanty homogenatów tkankowych.
Samodzielnie przygotowany Materiale
Końcówki do pipet wolne od RNaz, probówki wirówkowe 1,5 ml wolne od RNaz, wirówka, mieszadło wirowe i pipety.
Proces eksperymentu
Wykonaj wszystkie poniższe kroki w szafie bezpieczeństwa biologicznego.
1. Dodać 200 µl próbki do probówki wirówkowej wolnej od RNazy (w przypadku niewystarczającej ilości próbki uzupełnić PBS lub 0,9% NaCl), dodać 500 µl Buffer VL, dobrze wymieszać poprzez worteksowanie przez 15 – 30 sek. i wirować krótko, aby zebrać mieszaninę na dnie probówki.
2. Umieścić kolumny FastPure RNA w probówkach zbiorczych o pojemności 2 ml.Przenieść mieszaninę z etapu 1 do kolumn FastPure RNA, wirować przy 12 000 obr./min (13 400 × g) przez 1 minutę i odrzucić przesącz.
3. Dodaj 600 μl buforu RW do kolumn FastPure RNA, wiruj przy 12 000 obr./min (13 400 × g) przez 30 sekund i odrzuć przesącz.
4. Powtórz krok 3.
5. Wirować pustą kolumnę przy 12 000 obr./min (13 400 × g) przez 2 min.
6. Ostrożnie przenieść kolumny FastPure RNA do nowych probówek do pobierania próbek wolnych od RNaz o pojemności 1,5 ml (dołączonych do zestawu) i dodać 30 – 50 µl ddH2O wolnego od RNaz na środek membrany, nie dotykając kolumny.Pozostawić w temperaturze pokojowej na 1 minutę i wirować przy 12 000 obr./min (13 400 × g) przez 1 minutę.
7. Wyrzuć kolumny FastPure RNA.DNA/RNA można wykorzystać bezpośrednio do kolejnych testów lub przechowywać w temperaturze -30 ~ -15°C przez krótki okres lub -85 ~ -65°C przez dłuższy okres.
Notatki
Tylko do użytku badawczego.Nie do stosowania w procedurach diagnostycznych.
1. Wcześniej doprowadź próbki do temperatury pokojowej.
2. Wirusy są wysoce zakaźne.Przed eksperymentem należy upewnić się, że zostały podjęte wszystkie niezbędne środki ostrożności.
3. Unikaj wielokrotnego zamrażania i rozmrażania próbki, ponieważ może to prowadzić do degradacji lub zmniejszenia wydajności wyekstrahowanego wirusowego DNA/RNA.
4. Sprzęt do samodzielnego przygotowania obejmuje końcówki do pipet wolne od RNaz, probówki wirówkowe o pojemności 1,5 ml wolne od RNazy, wirówkę, mieszadło wirowe i pipety.
5. Podczas korzystania z zestawu należy nosić fartuch laboratoryjny, jednorazowe rękawiczki lateksowe i jednorazową maskę oraz używać materiałów niezawierających RNazy, aby zminimalizować ryzyko zanieczyszczenia RNazą.
6. Wykonaj wszystkie kroki w temperaturze pokojowej, chyba że określono inaczej.
Mechanizm i przepływ pracy
