Proteinaza K NGS (proszek)

Specyfikacja

Nieruchomości

Definicja jednostki

Jedną jednostkę NGS Protease K definiuje się jako ilość enzymu wymaganą do hydrolizy kazeiny do 1 μmol L-tyrozyny w standardowych warunkach oznaczania.

 Przygotowanie odczynników

Odczynnik I:

Substrat: 1% roztwór kazeiny z mleka bydlęcego: rozpuścić 1 g kazeiny z mleka bydlęcego w 50 ml 0,1 M roztworu fosforanu sodu o pH 8,0, ogrzewać w łaźni wodnej w temperaturze 65-70°C przez 15 minut, wymieszać i rozpuścić, ochłodzić wodą, według nastawy wodorotlenek sodu do pH 8,0 i rozcieńczyć do 100 ml.

Odczynnik II:

Roztwór TCA: 0,1 M kwas trichlorooctowy, 0,2 M octan sodu i 0,3 M kwas octowy (odważyć kolejno 1,64 g kwasu trichlorooctowego + 1,64 g octanu sodu + 1,724 ml kwasu octowego, dodać 50 ml wody dejonizowanej, doprowadzić HCl do pH 4,03 i rozcieńczyć 100 ml).

Odczynnik III:

0,4m roztwór węglanu sodu (odważ 4,24g bezwodnego węglanu sodu i rozpuść w 100ml wody)

Odczynnik IV:

Odczynnik fenolowy Folin: rozcieńczyć 5 razy wodą dejonizowaną.

Odczynnik V:

Rozcieńczalnik enzymu: 0,1 M roztwór fosforanu sodu, pH 8,0.

Odczynnik VI:

Roztwór wzorcowy L-tyrozyny: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml L-tyrozyna rozpuszczona w 0,2M HCl.

Procedura

1. Włącz spektrofotometr UV-Vis i wybierz pomiar fotometryczny.

2. Ustaw długość fali na 660 nm.

3. Włącz łaźnię wodną, ​​ustaw temperaturę na 37℃ i upewnij się, że temperatura nie uległa zmianie przez 3-5 minut.

4. Podgrzej 0,5 ml substratu w 2 ml probówce wirówkowej w łaźni wodnej o temperaturze 37°C przez 10 minut.

5. Ekstrahować 0,5 ml rozcieńczonego roztworu enzymu do podgrzanej probówki wirówkowej przez 10 minut.Ustaw rozcieńczalnik enzymu jako grupę ślepą.

6. Natychmiast po reakcji dodać 1,0 mL odczynnika TCA.Dobrze wymieszać i inkubować w łaźni wodnej przez 30 minut.