Klasa Ultra Nuclease GMP
Nr kat.: HC2016A
UltraNuclease klasy GMP ulega ekspresji i oczyszcza w Escherichia coli (E.coli) metodą inżynierii genetycznej i przygotowania w środowiskach GMP.Może zmniejszyć lepkość supernatantu komórkowego i lizatu komórkowego w badaniach naukowych, zwiększyć skuteczność oczyszczania białek i usprawnić badania funkcjonalne białek.Produkt może również redukować reszty kwasu nukleinowego gospodarza do poziomu pg, poprawiając wydajność i bezpieczeństwo produktów biologicznych do zastosowań, w tym do oczyszczania wirusów, produkcji szczepionek i produkcji farmaceutycznej białek/polisacharydów.Poza tym produkt można również stosować w celu zapobiegania zlepianiu się ludzkich jednojądrzastych komórek krwi obwodowej (PBMC) w terapii komórkowej i opracowywaniu szczepionek.
UltraNuclease dostarczany jest w postaci sterylizowanego odczynnika, eluowanego w buforze (20 mM Tris-HCL pH 8,0, 2 mM MgCl, 20 mM NaCl, 50% gliceryna), o wyglądzie bezbarwnej, przezroczystej cieczy.Ten produkt jest wytwarzany zgodnie z wymogami procesu GMP i dostarczany w postaci płynnej.
składniki
UltraNuclease klasy GMP (250 U/μL)
Warunki przechowywania
Produkt jest dostarczany z suchym lodem i można go przechowywać w temperaturze od -25°C do -15°C przez dwa lata.
Jeśli produkt został otwarty i był przechowywany w temperaturze 4℃ dłużej niż tydzień, zalecamy przefiltrowanieproduktu, aby zapobiec zanieczyszczeniu mikrobiologicznemu.
Dane techniczne
| Host wyrażeń | Rekombinowana E. coli z genem UltraNuclease |
| Waga molekularna | 26,5 kDa |
| punkt soelektryczny | 6,85 |
| Czystość | ≥99% (STRONA SDS) |
| Bufor magazynowy | 20 mM Tris-HCL pH 8,0, 2 mM MgCl, 20 mM NaCl, 50% gliceryna |
|
Definicja jednostki | Definicja jednej jednostki aktywności (U) to ilość użytego enzymuzmienić wartość absorpcji ΔA260 o 1,0 w ciągu 30 minut w 2,625 mlukład reakcyjny w temperaturze 37 ℃ i pH 8,0 (co odpowiada całkowitemu trawieniu37 µg DNA plemnika łososia na oligonukleotydy). |
Instrukcje
1. Próbka Kolekcja
Komórki przylegające: usunąć podłoże, przemyć komórki PBS i usunąć supernatant.
Komórki w zawiesinie: zebrać komórki przez odwirowanie, przemyć komórki PBS, wirować przy 6000obr/min przez 10 min, zebrać osad.
Escherichia coli: zebrać bakterie przez odwirowanie, przemyć jednokrotnie PBS, odwirować przy 8000 obr./minobroty na minutę przez 5 minut i zebrać osad.
2. Obróbka próbki
Zebrane osady komórkowe poddawać działaniu buforu do lizy w stosunku masy (g) do objętości (ml) 1:(10-20) lub metodami mechanicznymi lub chemicznymi na lodzie lub w temperaturze pokojowej (1 g osadu komórkowego zawiera około
109 komórek).
3. Leczenie enzymatyczne
Dodaj 1-5 mM MgCl do układu reakcyjnego i dostosuj pH do 8-9.
Dodać UltraNuclease w proporcji 250 jednostek, aby strawić 1 g osadów komórkowych, inkubować w temperaturze 37°C przez ponad 30 minut.Aby dokonać wyboru, prosimy zapoznać się z formularzem „Zalecany czas reakcji”.czas trwania leczenia.
4. Supernatant Kolekcja
Wirować przy 12 000 obr/min przez 30 minut i zebrać supernatant.
Uwaga: Jeśli roztwór jest kwaśny lub zasadowy albo zawiera duże stężenie soli, detergentów lubdenaturatami, należy odpowiednio zwiększyć dawkę enzymu lub odpowiednio wydłużyć czas leczenia.
Zalecane warunki reakcjions
| Parametr | Optymalny stan | Stan skuteczny |
| Mg²+stężenie | 1-5 mM | 1-10 mM |
| pH | 8-9 | 6-10 |
| Temperatura | 37 ℃ | 0-42 ℃ |
| Stężenie DTT | 0-100 mM | > 0 mM |
| Stężenie merkaptoetanolu | 0-100 mM | > 0 mM |
| Stężenie kationów jednowartościowych | 0-20 mM | 0-150 mM |
| Stężenie fosforanów | 0-10 mM | 0-100 mM |
Zalecana Reakcja Czas (37℃, 2 mM Mg²+, pH 8,0)
| Ilość ultranukleazy (stężenie końcowe) | Czas reakcji |
| 0,25 U/ml | >10 godz |
| 2,5 U/ml | >4h |
| 25 U/ml | 30 minut |
Uwagi:
Aby zapewnić sobie zdrowie i bezpieczeństwo, należy nosić niezbędne środki ochrony indywidualnej, takie jak fartuch laboratoryjny i rękawiczki!
