Inhibitor Rnazy (bez gliceryny)
Inhibitor mysiej RNazy jest rekombinowanym inhibitorem mysiej RNazy wyrażanym i oczyszczanym z E.coli.Wiąże się z RNazą A, B lub C w stosunku 1:1 poprzez wiązanie niekowalencyjne, hamując w ten sposób aktywność trzech enzymów i chroniąc RNA przed degradacją.Jednakże nie jest skuteczny przeciwko RNazie 1, RNazie T1, S1 Nukleazie, RNazie H lub RNazie z Aspergillus.Inhibitor mysiej RNazy testowano za pomocą mRNA RT-PCR, RT-qPCR i IVT i był on kompatybilny z różnymi dostępnymi na rynku odwrotnymi transkryptazami, polimerazami DNA i polimerazami RNA.
W porównaniu do ludzkich inhibitorów RNazy, mysi inhibitor RNazy nie zawiera dwóch cystein, które są bardzo wrażliwe na utlenianie, które powoduje inaktywację inhibitora.Dzięki temu jest stabilny przy niskich stężeniach DTT (poniżej 1 mM).Ta cecha sprawia, że nadaje się do stosowania w reakcjach, w których wysokie stężenia DTT są niekorzystne dla reakcji (np. RT-PCR w czasie rzeczywistym).
Azastosowanie
Produkt ten może być szeroko stosowany w każdym eksperymencie, w którym możliwa jest interferencja RNazy w celu uniknięcia degradacji RNA, np.:
1.Synteza pierwszej nici cDNA, RT-PCR, RT-qPCR itp.;
2.Chroń RNA przed degradacją podczas transkrypcji/translacji in vitro (np. replikacja wirusa in vitro);
3.Hamowanie aktywności RNazy podczas izolacji i oczyszczania RNA.
Warunki przechowywania
Przechowywać w temperaturze -25～-15℃;
Cykle zamrażania i rozmrażania ≤ 5 razy;
Ważne przez 1 rok.
Definicja jednostki
Jedną jednostkę definiuje się jako ilość inhibitora RNazy wymaganą do zahamowania aktywności 5 ng RNazy A o 50%.
Waga molekularna
Inhibitor RNazy (bez glicerolu) jest białkiem o masie 50 kDa.
Kontrola jakości
Egzonukleaza Działalność:
Inkubacja 40 U enzymu z 1 µg DNA trawionego λ-Hind III przez 16 godzin w temperaturze 37°C nie spowodowała wykrywalnej degradacji DNA, co określono metodą elektroforezy żelowej.
Aktywność endonukleazy:
Inkubacja 40 U enzymu z 1 µg λ DNA przez 16 godzin w temperaturze 37°C nie spowodowała wykrywalnej degradacji DNA, co określono metodą elektroforezy żelowej.
Nickowanie Działalność:
Inkubacja 40 U enzymu z 1 µg pBR322 przez 16 godzin w temperaturze 37°C nie spowodowała wykrywalnej degradacji DNA, co określono metodą elektroforezy żelowej.
RNaza Działalność:
Inkubacja 40 U enzymu z 1,6 µg RNA MS2 przez 4 godziny w temperaturze 37°C nie spowodowała wykrywalnej degradacji RNA, co określono metodą elektroforezy żelowej.
E.DNA coli:
40 U enzymu wykrywa się metodą TaqMan qPCR.DNA E.coli wynosi ≤ 0,1 µg/40U.
Nuwagas
1. Nie potrząsaj ani nie mieszaj gwałtownie, aby zapobiec inaktywacji enzymów.
2. Inhibitor RNazy jest aktywny w temperaturach od 25 ℃ do 55 ℃ i ulega inaktywacji w temperaturze ≥65 ℃.
3. Aktywność RNazy H, RNazy 1 i RNazy T1 nie jest hamowana.
4. Zakres pH hamujący aktywność RNazy jest szeroki (aktywny przy pH 5-9), wykazując maksymalną aktywność przy pH 7-8.
