Wrażliwy na temperaturę UNG
Wrażliwy na temperaturę UNG (TS-UNG) jest otrzymywany w wyniku rekombinacyjnej ekspresji w E. coli.Enzym katalizuje uwalnianie wolnego uracylu z jedno- i dwuniciowego DNA zawierającego uracyl i jest nieaktywny wobec RNA.W porównaniu z konwencjonalnym enzymem UNG pochodzącym z genu E. coli, enzym TS-UNG ma wyższą aktywność w niskich temperaturach (20 ℃ ~ 37 ℃), jest wrażliwy na temperaturę i łatwo inaktywuje się (50 ℃), co pozwala uniknąć degradacji amplifikacji zawierającej dUTP produktów w temperaturze pokojowej poprzez pozostałą aktywność, która może pozostać po inaktywacji konwencjonalnego enzymu UNG.Dlatego enzym TS-UNG nadaje się nie tylko do reakcji zapobiegania zanieczyszczeniom PCR, ale także dobrze pasuje do programu amplifikacji RT-PCR i może być stosowany w reakcji zapobiegania zanieczyszczeniom RT-PCR.
Zalecana aplikacja
Wzmocnienie zapobiegania zanieczyszczeniom
Stan przechowywania
-20°C w przypadku długotrwałego przechowywania, należy dobrze wymieszać przed użyciem, unikać częstego zamrażania i rozmrażania.
Bufor do przechowywania
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilizator, 50% gliceryny.
Definicja jednostki
Ilość enzymu potrzebna do rozkładu 1 µg jednoniciowego DNA zawierającego zasady dU w ciągu 1 godziny w temperaturze 37°C wynosi 1 jednostkę aktywności (U).
Kontrola jakości
1.Czystość elektroforetyczna SDS-PAGE większa niż 98%
2.Aktywność degradacyjna, kontrola między partiami, stabilność
3.Brak aktywności egzogennej nukleazy, brak zanieczyszczenia egzogenną endonukleazą lub egzonukleazą.
Instrukcje
| składniki | Objętość (µL) | Końcowe stężenie |
| 10 × bufor do PCR (wolny od dNTP, Mg²+bezpłatny) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 µM |
| dUTP (zastąp dTTP) | - | 200-600 µM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 µl | 1-4 mM |
| 5 U/μL Tak | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5U (0,1-0,5U) |
| 25 × Mieszanka podkładowaA | 2 | 1× |
| Szablon | - | ＜1 µg/reakcję |
| ddH₂O | Do 50 | - |
Uwaga: a: W przypadku stosowania do qPCR/qRT-PCR, do układu reakcyjnego należy dodać sondę fluorescencyjną.Zwykle końcowe stężenie startera wynoszące 0,2 µM może dać dobre wyniki;gdy przebieg reakcji jest słaby, stężenie startera można regulować w zakresie 0,2-1 µM.Zwykle stężenie sondy optymalizuje się w zakresie 0,1-0,3 µM.Aby znaleźć najlepszą kombinację startera i sondy, można przeprowadzić eksperymenty z gradientem stężeń.
Notatki
1.Optymalna temperatura reakcji enzymu TS-UNG jest stosunkowo niska i można ją optymalizować w zakresie 20 ℃ ~ 37 ℃, dawkę enzymu i czas reakcji można optymalizować w zakresie 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 minut;a enzym może zostać inaktywowany w procesie odwrotnej transkrypcji.
2.Nadaje się do PCR i RT-PCR, aby zapobiec zanieczyszczeniu.
3.Unikaj częstego zamrażania i rozmrażania oraz nie wystawiaj na duże wahania temperatury.
4.Różne geny przeznaczone do amplifikacji charakteryzują się różną wydajnością wykorzystania dUTP i wrażliwością na enzym UNG, dlatego jeśli zastosowanie systemu UNG prowadzi do zmniejszenia czułości detekcji, należy dostosować i zoptymalizować układ reakcji. W razie potrzeby wsparcia technicznego prosimy o kontakt nasza firma.
