Jednoetapowy zielony premiks RT-qPCR SYBR
Nr kat.: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix przeznaczony jest do ilościowego oznaczania fluorescencji w oparciu o barwnik SYBR Green I.Dzięki starterom specyficznym dla genu reakcje odwrotnej transkrypcji i qPCR są przeprowadzane w jednej probówce, co eliminuje potrzebę powtarzania operacji otwierania korka i pipetowania, znacznie poprawiając wydajność testu i zmniejszając ryzyko zanieczyszczenia.W przypadku próbek RNA zestaw wykorzystuje odporną na ciepło odwrotną transkryptazę do wydajnej syntezy cDNA oraz polimerazę DNA HotStart Taq do ilościowej amplifikacji.W zoptymalizowanym systemie buforów czułość zestawu może wynosić nawet 0,1 pg w przypadku obiektów docelowych o silnej ekspresji i aż do 1 pg w przypadku obiektów docelowych o umiarkowanej ekspresji.Zestaw nadaje się do amplifikacji i oznaczania ilościowego próbek DNA.Umożliwia czułe wykrywanie i oznaczanie ilościowe kwasów nukleinowych w różnych próbkach roślinnych i zwierzęcych, komórkach i mikroorganizmach.
składniki
| No | Nazwa | Tom | Tom |
| 1 | Zaawansowany bufor | 250 µL | 2×1,25 ml |
| 2 | Zaawansowana mieszanka enzymów | 20 µL | 200 µl |
| 3 | Wolny od RNazy H2O | 250 µL | 2×1,25 ml |
Warunki przechowywania
Ten produkt należy przechowywać w temperaturze -25 ~ -15 ℃ z dala od światła przez 1 rok.
Instrukcje
1.Konfiguracja układu reakcyjnegod
| składniki | Objętość (µL) | Objętość (µL) | Końcowe stężenie |
| Zaawansowany bufor | 12,5 | 25 | 1× |
| Zaawansowana mieszanka enzymów | 1 | 2 | - |
| Podkład do przodu (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/l |
| Podkład odwrotny (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/l |
| Tamplate RNAb | X | X | - |
| Wolny od RNazy H2Oc | do 25 | do 50 | - |
Uwagi:
1)TKońcowe stężenie startera wynosiło 0,2 µmol/l, które można było również regulować w zakresie od 0,1 do 1 µmol/l, odpowiednio.
2) b.Odczynnik jest niezwykle czuły, całkowity RNA mieści się w zakresie 1 pg–1 μg, a badanie próbek ludzkich wykazało optymalny wkład wynoszący 1 pg–100 ng, kontrolując ogólną wartość Ct w zakresie 15–30, odpowiednio.
3) c.Zaleca się użycie 20 µl lub 50 µl, aby zapewnić ważność i powtarzalność amplifikacji genu docelowego.
4) zm.Proszę przygotowywać na ultra czystym stole i używać końcówek i probówek reakcyjnych wolnych od pozostałości nukleaz;zalecane są końcówki z wkładami filtrującymi.Unikać zanieczyszczenia krzyżowego i zanieczyszczenia aerozolem.
2.Program reakcji
| Krok cyklu | Temp. | Czas | Cykle |
| Transkrypcja odwrotna | 50 ℃a | 6 minut | 1 |
| Początkowa denaturacja | 95 ℃ | 5 minut | 1 |
| Reakcja amplifikacji | 95 ℃ | 15 sek | 40 |
| 60 ℃b | 30 sek | ||
| Etap krzywej topnienia | Domyślne ustawienia instrumentu | 1 | |
Uwagi:
1)Temperaturę odwrotnej transkrypcji można wybrać w zakresie 50-55°C, w zależności od potrzeb doświadczalnych.W przypadku próbek DNA proces odwrotnej transkrypcji można pominąć.
2) b.W szczególnych przypadkach temperaturę wyżarzania/rozszerzania można dostosować w zależności od wartości Tm podkładu, zaleca się 60°C.
Notatki
1. Ten produkt jest przeznaczony wyłącznie do celów badawczych.
2. Dla własnego bezpieczeństwa należy używać fartuchów laboratoryjnych i rękawiczek jednorazowych.
