Inhibitor Rnazy
Inhibitor mysiej RNazy jest rekombinowanym inhibitorem mysiej RNazy wyrażanym i oczyszczanym z E.coli.Wiąże się z RNazą A, B lub C w stosunku 1:1 poprzez wiązanie niekowalencyjne, hamując w ten sposób aktywność trzech enzymów i chroniąc RNA przed degradacją.Jednakże nie jest skuteczny przeciwko RNazie 1, RNazie T1, S1 Nukleazie, RNazie H lub RNazie z Aspergillus.Inhibitor mysiej RNazy testowano za pomocą mRNA RT-PCR, RT-qPCR i IVT i był on kompatybilny z różnymi dostępnymi na rynku odwrotnymi transkryptazami, polimerazami DNA i polimerazami RNA.
W porównaniu do ludzkich inhibitorów RNazy, mysi inhibitor RNazy nie zawiera dwóch cystein, które są bardzo wrażliwe na utlenianie, które powoduje inaktywację inhibitora.Dzięki temu jest stabilny przy niskich stężeniach DTT (poniżej 1 mM).Ta cecha sprawia, że nadaje się do stosowania w reakcjach, w których wysokie stężenia DTT są niekorzystne dla reakcji (np. RT-PCR w czasie rzeczywistym).
Azastosowanie
Produkt ten może być szeroko stosowany w każdym eksperymencie, w którym możliwa jest interferencja RNazy w celu uniknięcia degradacji RNA, np.:
1.Synteza pierwszej nici cDNA, RT-PCR, RT-qPCR itp.
2.Chroni RNA przed degradacją podczas transkrypcji/translacji in vitro (np. system replikacji wirusa in vitro).
3.Hamowanie aktywności RNazy podczas separacji i oczyszczania RNA.
Warunki przechowywania
Produkt można przechowywać w temperaturze -25～- 15 ℃, ważność 2 lata.
Bufor do przechowywania
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7,6, 25 ℃), 8 mM DTT i 50% gliceryny.
Definicja jednostki
Ilość mysiego inhibitora RNazy wymaganą do zahamowania aktywności 5 ng rybonukleazy A o 50% zdefiniowano jako jedną jednostkę (U).
Masa cząsteczkowa białka
Masa cząsteczkowa mysiego inhibitora RNazy wynosi 50 kDa.
Kontrola jakości
Egzonukleaza Działalność:
40 U mysiego inhibitora RNazy z 1 µg DNA trawionego λ-Hind III w temperaturze 37°C przez 16 godzin nie powoduje degradacji, co stwierdzono metodą elektroforezy w żelu agarozowym.
Aktywność endonukleazy:
40 U mysiego inhibitora RNazy z 1 μg λ DNA w temperaturze 37°C przez 16 godzin nie powoduje degradacji, co określono metodą elektroforezy w żelu agarozowym.
Nickowanie Działalność:
40 U mysiego inhibitora RNazy z 1 μg pBR322 w temperaturze 37°C przez 16 godzin nie powoduje degradacji, co określono metodą elektroforezy w żelu agarozowym.
RNaza Działalność:
40 U mysiego inhibitora RNazy z 1,6 μg RNA MS2 przez 4 godziny w temperaturze 37°C nie powoduje degradacji, jak określono metodą elektroforezy w żelu agarozowym.
E.DNA coli:
40 U mysiego inhibitora RNazy przeszukuje się pod kątem obecności genomowego DNA E. coli przy użyciu TaqMan qPCR ze starterami specyficznymi dla locus 16S rRNA E. coli.Zanieczyszczenie genomowym DNA E. coli wynosi ≤ 0,1 pg/40 U.
Nuwagas
1. Gwałtowne oscylacje lub mieszanie prowadzą do inaktywacji enzymu.
2. Optymalny zakres temperatur tego inhibitora wynosił 25-55 ℃, a inaktywowano go w temperaturze 65 ℃ i wyższej.
3. Aktywność RNazy H, RNazy 1 i RNazy T1 nie była hamowana przez mysi inhibitor RNazy.
4.Stwierdzono hamowanie aktywności RNazy w szerokim zakresie pH (wszystkie pH 5-9 były aktywne), a największą aktywność zaobserwowano przy pH 7-8.
5. Ponieważ rybonukleazy zazwyczaj zachowują aktywność w warunkach denaturujących, należy zachować ostrożność, aby uniknąć denaturacji cząsteczek Inhibitora RNazy, które utworzyły kompleks z rybonukleazą.Aby zapobiec uwalnianiu aktywnej rybonukleazy, należy unikać temperatur wyższych niż 50 °C i wysokich stężeń mocznika lub innych środków denaturujących.
