Rnaza A
Rybonukleaza A(RNaseA) jest jednoniciowym polipeptydem zawierającym 4 wiązania dwusiarczkowe o masie cząsteczkowej około 13,7 kDa.RNaza A jest endorybonukleazą, która specyficznie degraduje jednoniciowy RNA na resztach C i U.W szczególności rozszczepienie rozpoznaje wiązanie fosfodiestrowe utworzone przez 5'-rybozę nukleotydu i grupę fosforanową na 3'-rybozie sąsiedniego nukleotydu pirymidynowego, tak że 2,3'-cykliczne fosforany ulegają hydrolizie do odpowiednich 3 „fosforany nukleozydów (np. pG-pG-pC-pA-pG jest rozszczepiane przez RNazę A z wytworzeniem pG-pG-pCp i A-PG).RNaza A jest najbardziej aktywna w rozszczepianiu jednoniciowego RNA.Zalecane stężenie robocze wynosi 1-100 μG/ml, kompatybilne z różnymi systemami reakcyjnymi.Niskie stężenie soli (0-100 mM NaCl) można zastosować do cięcia jednoniciowego RNA, dwuniciowego RNA i łańcuchów RNA utworzonych w wyniku hybrydyzacji RNA-DNA.
Jednakże przy wysokim stężeniu soli (≥0,3 M) RNaza A specyficznie tnie tylko jednoniciowy RNA.
RNaza A jest najczęściej stosowana do usuwania RNA podczas przygotowywania plazmidowego DNA lub genomowego DNA.To, czy DNaza jest aktywna podczas procesu przygotowania, może łatwo wpłynąć na reakcję.Do inaktywacji aktywności DNazy można zastosować tradycyjną metodę gotowania w łaźni wodnej.Ten produkt nie zawiera DNazy i proteazy i nie wymaga obróbki cieplnej przed użyciem.Ponadto produkt ten można również stosować w eksperymentach z zakresu biologii molekularnej, takich jak analiza ochrony RNazy i analiza sekwencji RNA.
Warunki przechowywania
Produkt należy przechowywać w temperaturze -25℃~-15℃ przez 2 lata.
Dane techniczne
| Wygląd | Proszek |
| Ilość | 100mg/1g |
| Rodzaj produktu | RNaza A |
Instrukcje
Jest to jedna z powszechnych metod przygotowywania roztworu do przechowywania RNazy A.Można go również przygotowaćinnymi metodami, zgodnie z tradycyjnymi metodami opisanymi w laboratorium lub literaturze przedmiotu (npbezpośrednio rozpuszczając się w 10 mM roztworze Tris-HCl, pH 7,5 lub Tris-NaCl)
1. Użyj 10 mM octanu sodu (pH 5,2), aby przygotować 10 mg/ml roztworu do przechowywania RNazy A.
2. Ogrzewanie w temperaturze 100 ℃ przez 15 min.
3. Ochłodzić do temperatury pokojowej, dodać 1/10 objętości 1 M Tris-HCl (pH 7,4), dostosować pH do 7,4 (dlana przykład dodać 500 ml 10 mg/ml roztworu do przechowywania RNazy 1 M Tris-HCl, pH 7,4).
4. Pakowane w temperaturze -20 ℃ do przechowywania w zamrożeniu, które może być stabilne przez okres do 2 lat.
[Uwagi]:
Podczas gotowania roztworu RNazyA w warunkach neutralnych nastąpi wytrącenie RNazy;Gotujemy w niższym pH, a jeśli nastąpi wytrącenie, to można zaobserwować, co może być spowodowane obecnością zanieczyszczeń białkowych.Jeśli po gotowaniu zostanie znaleziony osad, zanieczyszczenia można usunąć poprzez wirowanie z dużą prędkością (13000 obr./min), a następnie zapakować w celu przechowywania w zamrażarce.
Notatki
Aby zapewnić sobie zdrowie i bezpieczeństwo, należy nosić niezbędne środki ochrony indywidualnej, takie jak fartuch laboratoryjny i rękawiczki.
