Rnaza A
Rybonukleaza A (RNaseA) jest jednoniciowym polipeptydem zawierającym 4 wiązania dwusiarczkowe o masie cząsteczkowej około 13,7 kDa.RNaza A jest endorybonukleazą, która specyficznie degraduje jednoniciowy RNA na resztach C i U.W szczególności rozszczepienie rozpoznaje wiązanie fosfodiestrowe utworzone przez 5′-rybozę nukleotydu i grupę fosforanową na 3′-rybozie sąsiedniego nukleotydu pirymidynowego, tak że 2,3′-cykliczne fosforany ulegają hydrolizie do odpowiedniego 3 ′fosforany nukleozydów (np. pG-pG-pC-pA-pG jest rozszczepiane przez RNazę A z wytworzeniem pG-pG-pCp i A-PG).RNaza A jest najbardziej aktywna w rozszczepianiu jednoniciowego RNA.Zalecane stężenie robocze wynosi 1-100 μG/ml, kompatybilne z różnymi systemami reakcyjnymi.Niskie stężenie soli (0-100 mM NaCl) można zastosować do cięcia jednoniciowego RNA, dwuniciowego RNA i łańcuchów RNA utworzonych w wyniku hybrydyzacji RNA-DNA.Jednakże przy wysokim stężeniu soli (≥0,3 M) RNaza A specyficznie tnie jedynie jednoniciowy RNA.
RNaza A jest najczęściej stosowana do usuwania RNA podczas przygotowywania plazmidowego DNA lub genomowego DNA. Niezależnie od tego, czy DNaza jest aktywna podczas procesu przygotowania, czy nie, może łatwo wpłynąć na reakcję.Do inaktywacji aktywności DNazy można zastosować tradycyjną metodę gotowania w łaźni wodnej.Ten produkt nie zawiera DNazy i proteazy i nie wymaga obróbki cieplnej przed użyciem.Ponadto produkt ten można również stosować w eksperymentach z zakresu biologii molekularnej, takich jak analiza ochrony RNazy i analiza sekwencji RNA.
Warunki przechowywania
Produkt można przechowywać w temperaturze -25～-15℃, ważny przez 2 lata.
Instrukcje
Jest to jedna z powszechnych metod przygotowywania roztworu do przechowywania RNazy A.Można go również przygotować wginne metody zgodnie z tradycyjnymi metodami opisanymi w laboratorium lub literaturze przedmiotu (npbezpośrednio rozpuszczając się w 10 mM roztworze Tris-HCl, pH 7,5 lub Tris-NaCl)
1. Użyj 10 mM octanu sodu (pH 5,2), aby przygotować 10 mg/ml roztworu do przechowywania RNazy A
2. Ogrzewanie w temperaturze 100 ℃ przez 15 min
3. Ochłodzić do temperatury pokojowej, dodać 1/10 objętości 1 M Tris-HCl (pH 7,4), dostosować pH do 7,4 (dlaprzykładowo dodaj 500 ml 10 g/ml roztworu do przechowywania RNazy 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Pakowane w temperaturze -20 ℃ do przechowywania w stanie zamrożonym, które może być stabilne przez okres do 2 lat.
[Uwagi]: Podczas gotowania roztworu RNazyA w warunkach neutralnych nastąpi wytrącenie RNazy;Gotujemy w niższym pH, a jeśli nastąpi wytrącenie, to można zaobserwować, co może być spowodowane obecnością zanieczyszczeń białkowych.Jeśli po gotowaniu zostanie znaleziony osad, zanieczyszczenia można usunąć poprzez wirowanie z dużą prędkością (13000 obr./min), a następnie zapakować w celu przechowywania w zamrażarce.
Informacje o produkcie
| Synonimy | Rybonukleaza I;rybonukleaza trzustkowa;Rybonukleaza 3'-pirymidnooligonukleotydohydrolaza;Rnaza A;Endorybonulceaza I |
| Nr CAS | 9001-99-4 |
| Wygląd | Biały liofilizowany proszek |
| Waga molekularna | ~ 13,7 kDa (sekwencja aminokwasów) |
| Wartość PH | 7,6 (zakres aktywności 6-10) |
| Odpowiednia temperatura | 60 ℃ (zakres aktywności 15-70 ℃) |
| Środek aktywujący | Na2+.K+ |
| Inhibitor | Inhibitor Rnazy |
| Metoda inaktywacji | Nie można inaktywować przez ogrzewanie, zaleca się użycie kolumny wirówkowej |
| Pochodzenie | Wołowy |
| Rozpuszczalność | Rozpuszczalny w wodzie (10 mg/ml) |
| Strata na suchym | ≤5,0% |
| Aktywność enzymatyczna | ≥60 jednostek Kunitza/mg |
| Punkt izoelektryczny | 9.6 |
Notatki
W trosce o Państwa bezpieczeństwo i zdrowie prosimy o noszenie fartuchów laboratoryjnych oraz rękawiczek jednorazowych.
