2×HiF Taq plus miks główny
Nr kat.: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (z barwnikiem) to gotowy do użycia 2× wstępnie zmieszany roztwór zawierający polimerazę DNA Plus HIF, dNTP i zoptymalizowany bufor.Do mieszaniny głównej dodaje się dwa przeciwciała monoklonalne w temperaturze pokojowej, które hamują aktywność polimerazy i aktywność 3′ → 5′egzonukleazy, aby umożliwić łatwą i wysoce specyficzną PCR Hot Start.Do mieszaniny głównej dodaje się współczynnik rozszerzenia, aby zapewnić enzymowi zdolność amplifikacji długich fragmentów, długość amplifikacji może wynosić do 13 kb, enzym ma aktywność polimerazy DNA 5′ → 3′ i aktywność 3′ → 5′ aktywność egzonukleazy, jej wierność jest 83 razy większa niż w przypadku polimerazy DNA Taq, która jest 9 razy większa niż w przypadku zwykłej polimerazy DNA.Nadaje się do amplifikacji złożonych szablonów, produkt amplifikacji jest tępym końcem.
2×HIF Taq plus Master Mix (z barwnikiem) ma zalety takie jak szybkość i łatwość, wysoka czułość, duża specyficzność, dobra stabilność itp., system reakcyjny wymaga jedynie dodania starterów i szablonów i może być amplifikowany za pomocą dwu- protokół krokowy, upraszczający etapy eksperymentalne i oszczędzający czas.Produkt zawiera barwniki wskaźnikowe do elektroforezy, a produkty PCR można stosować bezpośrednio do elektroforezy.Dodatkowo produkt zawiera także specyficzny środek ochronny, dzięki czemu master mix może zachować stabilną aktywność po wielokrotnym zamrażaniu i rozmrażaniu.
Warunki przechowywania
Produkty należy przechowywać w temperaturze -25 ~ -15 ℃ przez 1 rok.
Dane techniczne
| Specyfikacja produktu | Mistrzowska mieszanka |
| Stężenie | 2× |
| Gorący start | Wbudowany gorący start |
| Zwis | Tępy |
| Szybkość reakcji | Szybki |
| Rozmiar (produkt końcowy) | Do 13kb |
| Warunki transportu | Suchy lód |
| Rodzaj produktu | Premiksy PCR o wysokiej wierności |
Instrukcje
1.Układ reakcji PCR
| składniki | Objętość (µL) |
| Szablon DNA | Odpowiedni |
| Podkład do przodu (10 μmol/L) | 2.5 |
| Podkład odwrotny (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | do 50 |
2.Zalecane użycie różnych szablonów
| Typ szablonu | Wzmocnij fragmenty o wielkości od 1 kb do 10 kb |
| Genomowe DNA | 50 ng-200 ng |
| DNA plazmidowe lub wirusowe | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2,5 µL (nie przekraczać 10% końcowej objętości reakcji PCR) |
3.Protokół amplifikacji
1) Protokół dwuetapowy (szablon złożoności)
| Krok cyklu | Temp. | Czas | Cykle |
| Początkowa denaturacja | 98℃ | 3 minuty | 1 |
| Denaturacja | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
| Rozszerzenie | 68 ℃ | 30 sek./kb | |
| Ostateczne przedłużenie | 72 ℃ | 5 minut | 1 |
2) Protokół trójetapowy (protokół zwykły)
| Krok cyklu | Temp. | Czas | Cykle |
| Początkowa denaturacja | 98℃ | 3 minuty | 1 |
| Denaturacja | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
| Wyżarzanie | 60 ℃ | 20 sek | |
| Rozszerzenie | 72 ℃ | 30 sek./kb | |
| Ostateczne przedłużenie | 72 ℃ | 5 minut | 1 |
3) Protokół gradientu wyżarzania (szablon złożoności)
| Krok cyklu | Temperatura | Czas | Cykle |
| Początkowa denaturacja | 98℃ | 3 minuty | 1 |
| Denaturacja | 98℃ | 10 sek | 15 (Redukcja o 1℃ na cykl) |
| Wyżarzanie gradientowe | 70-55 ℃ | 20 sek | |
| Rozszerzenie | 72 ℃ | 30 sek./kb | |
| Denaturacja | 98℃ | 10 sek |
20 |
| Wyżarzanie | 55 ℃ | 20 sek | |
| Rozszerzenie | 72 ℃ | 30 sek./kb | |
| Ostateczne przedłużenie | 72 ℃ | 5 minut | 1 |
Funkcje w ramach innego protokołu wzmocnienia
| Protokółl | Dwuetapowy | Trzyetapowy | Wyżarzanie gradientowe |
| Spec. | szybko | średni | powolny |
| Specyficzność | wysoki | średni | wysoki |
| Wydajność PCR | średni | wysoki | średni |
| Szybkość wykrywania | wysoki | średni | wysoki |
Notatki
Aby zapewnić sobie zdrowie i bezpieczeństwo, należy nosić niezbędne środki ochrony indywidualnej, takie jak fartuch laboratoryjny i rękawiczki!
